淺看植物DNA提取試劑盒從植物培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA

 
　　植物DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的，能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯芐具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化，從而破壞細(xì)胞壁的特性。本制品利用了氯芐的這一特性，將植物樣品凍結(jié)融解后，再使用PipetTip的尖將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細(xì)胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比，省去了液氮研磨等煩瑣步驟，有利于一次性處理大量樣品。而且，本制品經(jīng)過(guò)了改良，熱處理時(shí)間只需15分鐘，使用本制品從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至水相回收只需30分鐘時(shí)間。得到的基因組DNA可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增及限制酶處理等。
　　植物DNA提取試劑盒從植物材料或植物培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA
　?、侔聪卤矸Q(chēng)取適量的新鮮植物材料(如選用的是冷凍干燥植物材料，則用量減半)，剪成小塊放入研缽中，加入液氮，待樣品冷凍*后快速、用力研磨至粉末狀。研磨時(shí)應(yīng)間斷加入液氮以防止材料融化。
　　*如選取植物的根、種子等樣品時(shí)，因其基因組DNA含量很低，需使用超過(guò)表格中所示的參數(shù)用量，此時(shí)請(qǐng)分兩管進(jìn)行步驟1~6的實(shí)驗(yàn)操作，在步驟7的操作中再將各管溶液分次加入至同一SpinColumn中過(guò)濾，使各管的基因組DNA結(jié)合到同一個(gè)SpinColumn上。
　　如從培養(yǎng)的植物細(xì)胞中提取基因組DNA，請(qǐng)離心收集2×103~1×107的培養(yǎng)植物細(xì)胞，加入150μl水充分懸浮細(xì)胞后移入研缽中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末狀。
　　注)樣品研磨應(yīng)充分，否則將會(huì)嚴(yán)重影響基因組DNA的收率。
　?、趯⒀欣徱浦?5℃水浴，當(dāng)樣品粉末剛開(kāi)始融化時(shí)，向研缽中加入700μl的SolutionA和1.2μl的RNaseA1，用力碾磨30秒。
　　③收集650μl研磨好的組織勻漿移至CollectionTube中。如勻漿體積不足650μl，請(qǐng)補(bǔ)充SolutionA至650μl。65℃保溫15分鐘。
　　注)處理富含纖維的根/莖等植物材料或富含淀粉、蛋白質(zhì)的種子等時(shí)，可延長(zhǎng)水浴時(shí)間至60分鐘。